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病毒包涵体染色法简介

2022-01-08 23:01  阅读(22)  评论(0)  分类:专业

    关于病毒包涵体,我已写过2篇博文(病毒性包涵体,2013-09-09;再谈病毒包涵体,2020-4-27),对其形态学表现及其诊断价值进行介绍。下面再对其染色和显示方法进行简要介绍。

病毒非常微小,直径约为10~30nm,用光学显微镜无法观察到。但是当病毒侵入机体形成包涵体后,使宿主细胞形态发生变化,光镜下有可能发现。如应用某些特殊染色方法,就可以清晰显示它们所在的部位和形态,以便确定诊断。如狂犬病病毒胞质内嗜酸性包涵体(Negri小体)可以用PAS染色、Machiavello染色、荧光桃红-酒石黄染色、Mann甲基蓝伊红染色来显示。免疫组化染色可更好地显示病毒感染。    

1.Machiavello氏改良法  染色步骤依次为:切片脱蜡至水;0.5%高锰酸钾氧化切片5m,水洗;4.2%草酸水溶液漂白切片2m,水洗;0.25%淡绿水溶液或伊红作对比染色,水洗;0.25%柠檬酸水溶液分化切片20s,于显微镜下控制,水洗;1%甲基蓝作对比染色30s;水洗;风干切片,二甲苯透明,中性树胶封固。  染色结果:冠状病毒等包涵体于肺组织细胞质内呈鲜红色,细胞核呈蓝色。纤维蛋白渗出物呈粉红色,结缔组织呈蓝色。

2.Giemsa染色法  染色步骤依次为:切片脱蜡至水,蒸馏水洗;浸入0.01M磷酸盐溶液(PBS)pH7.6中,换洗3次,3m/次;浸染于pH7.6的Giemsa染液中过夜;PBS冲洗15m;0.01%柠檬酸水溶液分化,于镜下控制,蒸馏水洗;晾干或吸干切片;脱水、透明,中性树胶封固。此法可显示多种病毒包涵体。染色结果:SARS病毒包涵体于肺细胞胞质中呈现鲜红色;呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒包涵体于肺组织的细胞核内,在没有形成包涵体前呈鲜红色,形成包涵体后呈深紫色至蓝色。红细胞显示绿色。   

3.伊红甲基蓝染色法: 染色步骤依次为:切片脱蜡,蒸馏水洗;浸入PBS 3次,3m/次;浸入伊红和甲基蓝浸染液中浸染过夜;0.01M PBS冲洗10~15分钟;  0.01柠檬酸水溶液分化切片,镜下控制;风干,二甲苯透明,中性树胶封固。染色结果:呼吸道合胞病毒和巨细胞病毒包涵体呈深蓝色或绿色,位于细胞核内,胶原纤维呈浅蓝绿色;SARS病毒包涵体不着色。

4.Mann亚甲蓝伊红染色法  染色步骤依次为:切片脱蜡至蒸馏水;用亚甲蓝伊红染液染色8-24h;蒸馏水洗;分化液分化20-30m;丙酮脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。染色结果:病毒包涵体呈红色,细胞核呈蓝色。

5.荧光桃红-酒石黄染色法  染色步骤依次为:切片脱蜡,水化;用明矾苏木素着染细胞核10m,水洗5m;放入荧光桃红溶液中染色20m;水洗,吸干玻片;显微镜下控制染色,当酒石黄溶液将病毒包涵体染成鲜红色时停止;95%酒精冲洗;脱水,透明,封片。染色结果:病毒包涵体呈鲜红色,细胞核呈蓝灰色。 

本文旨在推介与病毒包涵体有关的一些方法,便于必要时选用。至于各种染液的配制方法,染色技术和注意事项等,详见有关技术专著,本文不再赘述。


 

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