上一节，我们介绍了HER2检测方法，了解FISH作为金标准方法在HER2检测中的重要意义。这一节我们结合指南中HER2 FISH结果判读方法和临床经验，重点阐述结果判读的要点。

一．信号观察流程

1.首先在HE/IHC切片上确认肿瘤区域；

2.在10×物镜下，于FISH标本上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构；

3.在40×物镜下扫描整张切片，观察是否存在异质性，要求至少找到2个浸润癌区域，计数至少20个浸润癌细胞。满意的标本应是75%以上癌细胞核中有杂交信号；

4.在100×物镜下观察癌细胞核的FISH结果进行信号计数，注意上下调整焦距，以免遗漏信号。

二．实验失败、不能判读的情况

1.因操作等原因，细胞核被损坏，边界不完整；

2.组织过度消化，细胞核边界不完整，DAPI染色浅；

3.组织消化不足，25%以上的细胞核无信号；

4.自发荧光很强或细胞核分辨差，10%细胞核外有信号。

三．计数要求

1.计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识；

2.选择具较好核分界的区域，要求细胞核大小基本一致、边界完整，DAPI染色均匀、核无重叠，绿色着丝粒信号清晰；

3.随机计数确定的肿瘤区域中20～30个细胞核中的双色信号，不要主观选择信号多的核计数；

4.不要计数仅显示一种颜色信号的细胞核；

5.避免计数分裂像的细胞核或被细胞核分裂及边界不完整核；

6.如果2个同样大小的橘红信号之间距离不足一个常规橘红信号大小，只计为一个信号；

7.若红、绿两信号的比值>20或众多信号连接成簇时可不计数，视为基因扩增；

8.若为临界值，则需要再计数20个细胞核中的信号或由另外一个观察者重新计数，如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明，或换其它方法或其它蜡块重新检测；

9.若HER2基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时，应在另一癌区域再计算20～30个癌细胞核中的红、绿信号值，报告其最大值，并加以注释；

10.判读时可以将乳腺组织中的正常细胞(如成纤维细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳腺上皮细胞)的HER2信号和CSP17信号作为内对照。

四．结果判读

在清晰的肿瘤区域，按以上计数要求在至少20个核内计数GSP HER2（红色）和CSP17（绿色）信号，分别记录GSP HER2和CSP17的信号总数，再计算平均每个细胞HER2拷贝数、平均每个细胞CSP17拷贝数以及GSP HER2和CSP17比值。

注：a：对于HER2/CSP17比值≥2.0，但平均HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为FISH阳性目前尚存争议，建议对这部分病例在报告中加以备注，提示目前的争议，建议临床医师参考免疫组织化学检测结果并与患者进行必要的沟通；

b：见于均质、连续的浸润细胞，且占浸润癌的10％以上

五．HER2 FISH判读标准的变化

新旧判读标准的比较：

①2014版新标准的截断值为2.0，2009版老标准的截断值为1.8和2.2；

②2014版新标准不只是HER2/CSP17的比值，需结合HER2基因的拷贝数进行判读；2009版则仅根据HER2/CSP17的比值进行判读，不考虑HER2基因拷贝数。

新旧判读标准衔接中可能出现的问题：

①2014版新标准出现HER2检测结果不确定的情况会比2009版标准更少；

②2014版新标准判读阴阳性结合了HER2基因的拷贝数，有些2009版标准判读结果为阴性的标本，如果HER2基因拷贝数≥6.0，2014版新标准则判为阳性。

[《乳腺癌HER2检测指南2009版》与《乳腺癌HER2检测指南2014版》]