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病毒包涵体染色法简介

2022-01-08 23:01 阅读(2042) 评论(0) 分类：专业

关于病毒包涵体，我已写过2篇博文(病毒性包涵体，2013-09-09；再谈病毒包涵体，2020-4-27)，对其形态学表现及其诊断价值进行介绍。下面再对其染色和显示方法进行简要介绍。

病毒非常微小，直径约为10～30nm，用光学显微镜无法观察到。但是当病毒侵入机体形成包涵体后，使宿主细胞形态发生变化，光镜下有可能发现。如应用某些特殊染色方法，就可以清晰显示它们所在的部位和形态，以便确定诊断。如狂犬病病毒胞质内嗜酸性包涵体(Negri小体)可以用PAS染色、Machiavello染色、荧光桃红-酒石黄染色、Mann甲基蓝伊红染色来显示。免疫组化染色可更好地显示病毒感染。

1．Machiavello氏改良法染色步骤依次为:切片脱蜡至水；0.5%高锰酸钾氧化切片5m，水洗；4.2%草酸水溶液漂白切片2m，水洗；0.25%淡绿水溶液或伊红作对比染色，水洗；0.25%柠檬酸水溶液分化切片20s，于显微镜下控制，水洗；1%甲基蓝作对比染色30s；水洗；风干切片，二甲苯透明，中性树胶封固。染色结果：冠状病毒等包涵体于肺组织细胞质内呈鲜红色，细胞核呈蓝色。纤维蛋白渗出物呈粉红色，结缔组织呈蓝色。

2.Giemsa染色法染色步骤依次为:切片脱蜡至水，蒸馏水洗；浸入0.01M磷酸盐溶液（PBS）pH7.6中，换洗3次，3m/次；浸染于pH7.6的Giemsa染液中过夜；PBS冲洗15m；0.01%柠檬酸水溶液分化，于镜下控制，蒸馏水洗；晾干或吸干切片；脱水、透明，中性树胶封固。此法可显示多种病毒包涵体。染色结果：SARS病毒包涵体于肺细胞胞质中呈现鲜红色；呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒包涵体于肺组织的细胞核内，在没有形成包涵体前呈鲜红色，形成包涵体后呈深紫色至蓝色。红细胞显示绿色。

3.伊红甲基蓝染色法: 染色步骤依次为:切片脱蜡，蒸馏水洗；浸入PBS 3次，3m/次；浸入伊红和甲基蓝浸染液中浸染过夜；0.01M PBS冲洗10～15分钟； 0.01柠檬酸水溶液分化切片，镜下控制；风干，二甲苯透明，中性树胶封固。染色结果：呼吸道合胞病毒和巨细胞病毒包涵体呈深蓝色或绿色，位于细胞核内，胶原纤维呈浅蓝绿色；SARS病毒包涵体不着色。

4.Mann亚甲蓝伊红染色法染色步骤依次为:切片脱蜡至蒸馏水；用亚甲蓝伊红染液染色8-24h;蒸馏水洗；分化液分化20-30m；丙酮脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。染色结果:病毒包涵体呈红色，细胞核呈蓝色。

5.荧光桃红-酒石黄染色法染色步骤依次为:切片脱蜡，水化；用明矾苏木素着染细胞核10m，水洗5m；放入荧光桃红溶液中染色20m；水洗，吸干玻片；显微镜下控制染色，当酒石黄溶液将病毒包涵体染成鲜红色时停止；95%酒精冲洗；脱水，透明，封片。染色结果:病毒包涵体呈鲜红色，细胞核呈蓝灰色。

本文旨在推介与病毒包涵体有关的一些方法，便于必要时选用。至于各种染液的配制方法，染色技术和注意事项等，详见有关技术专著，本文不再赘述。