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介绍几种日常工作中常见组织的脱钙方法
所谓脱钙,就是用化学或物理的方法把组织内的磷酸钙和碳酸钙去除。 骨、牙齿及钙化组织,质地硬,如果不处理就无法切片。
脱钙的方法很多,硝酸脱钙速度很快,但细胞核不容易上色,对抗原也影响较大。EDTA、电解等方法染色鲜艳,对抗原保存好,但脱钙时间较长。脱钙配方有很多,主要要根据你处理组织的类型、要求以及允许你完成脱钙的时间,也就是说有多少时间让你脱钙。
硝酸,脱钙能力很强,速度很快,如果在刚脱完后就立即中止,效果也不错。但由于其脱钙速度快,不容易控制时间,日常工作中不可能过几分钟就去看一下,所以非常容易脱钙过度,导致细胞核无法上色。
盐酸,脱钙速度中等,脱钙时间容易控制且不容易过度,因此,在日常工作中最为常用。
脱钙的原则:
1、要能切片;
2、染色对比要鲜明,最起码细胞核能染上色;
3、尽可能保存抗原;
4、时间要快,但要容易控制。
脱钙的关键:
1、不能脱过了;
2、脱钙后流水冲洗要充分。
因此,选择一种合适的脱钙液及处理方法,非常重要。
现介绍几种日常工作中常见组织的脱钙方法:
1. 骨髓组织:
可用Bouin液(75ml饱和苦味酸水溶液 +20ml甲醛 +5ml乙酸)固定24~48 小时,再用甲酸盐酸液(5ml甲酸 + 7g氯化铝 + 8.5ml盐酸 + 10ml甲醛,加水至100ml)或10%盐酸甲醛液(10ml盐酸 + 10ml甲醛 + 80ml水)脱钙3~5 小时,流水冲洗1~2 小时,放入常规流程固定脱水。如果用4%中性甲醛固定,然后再脱钙,会造成细胞收缩(核变小、胞浆空洞化)、核染色质不清晰。
4%中性甲醛固定后脱钙的骨髓:
用Bouin液固定后脱钙的骨髓:
2. 钙化、疏松骨组织:
可用甲酸盐酸液或10%盐酸甲醛液脱钙6~24小时,流水冲洗3~4小时,放入常规流程固定脱水。较硬的角质层、瘢痕等组织也可用10%盐酸甲醛液(或10%乙酸)软化。
3. 致密骨组织:
锯成薄片,用30%盐酸甲醛液(30ml盐酸 + 10ml甲醛 + 60ml水)脱钙数小时至数日,用针检查脱钙效果,容易刺穿后中止,流水冲洗3~4小时,放入常规流程固定脱水。
4. 切片过程中发现蜡块有钙化或脱钙不彻底:
可将蜡块直接脱钙将蜡块组织面修出后直接放入10%或30%盐酸甲醛液1~3 小时(也可用10%硝酸30~60 分钟),流水冲洗5~10 分钟,然后直接切片。注意只要脱到能切几张就可以了,不要过度,否则钙质完全脱去后会造成组织软化直至无法切片。
有钙的蜡块:
修出切面后放入脱钙液内:
脱钙前的切片:
脱钙后的切片:
详细内容请见:
【来自公众号 中华病理技术网】
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