来源：实验与检验医学

　　在日常病理工作中，由于各种不同原因往往导致病理切片质量低劣，造成诊断医师镜下诊断困难。常规病理制片是病理切片技术最重要的部分，分取材、固定、脱水、包埋、切片、染色、封片等几个主要步骤。笔者根据多年工作经验、操作实践将体会总结如下。

　　1、固定

　　新鲜组织经过适当的固定才能保持细胞和组织的固有形态，否则细胞内的各种酶在缺氧条件下将细胞内的蛋白质分解破坏导致组织自溶。当组织进入固定液后能制止自溶，保持组织细胞原形及结构。因此，手术切除的组织标本一定要及时固定。我院采用10%的甲醛溶液固定组织，固定液的量为10倍于组织标本的总体积。容器视标本大小而定，使标本放入后不会变形。

　　2、取材

　　所取组织块应形状规则，大小适中，薄厚一致，一般为11.5mm×11.5mm×1.2mm。对于一些组织的取材可灵活掌握，对质硬韧的组织可取薄一些，如平滑肌瘤组织；而一些疏松组织可适当取厚一些，如脂肪；骨组织的取材应在脱钙充分后进行，用大头针轻扎骨组织可穿入即可。取材切忌用力挤压，否则易使组织受压变形、结构破坏。

　　3、脱水

　　我院使用LaicaTP1020组织脱水机。取材后的组织在处理过程中的各种试剂均可挥发，导致试剂浓度降低；当试剂中混杂有其他试剂或组织碎屑时，可影响组织的脱水、透明、浸蜡或造成组织的污染，甚至产生误诊。脱蜡不净或试剂过于陈旧时，往往会造成切片破碎或太厚、染色不良而影响诊断；切片不完整有飞片，往往是组织固定不佳、脱水不彻底，致使石蜡无法浸入组织内造成；蜡块中央出现凹陷，组织与蜡之间产生灰白色晕圈，一般由组织脱水过度，浸蜡温度过高，时间过长引起组织变脆、硬及包埋组织硬度大于石蜡硬度，造成切片时组织弹出蜡块或切片出现皱褶，不易展开或见水自然脱开[1]。因此，应根据标本量的大小或观察组织处理情况，及时更换试剂，掌握好脱水时间，做到脱水彻底，控制组织浸蜡的温度适宜。

　　4、包埋

　　小块组织应呈线状包埋，大块组织应在包埋时将其压平，防止出现切片不完全及片内组织杂乱无章的情况而造成误诊。对一些囊壁、管壁组织或有突起的组织应将其立埋，即包埋沿突起纵切面包埋，以便观察其各个层次。为保证切片顺利应使用熔点为60～62℃的石蜡进行包埋。

　　5、切片

　　切片时尽可能保持切片的完整、较薄且均匀，一般2～3μm，对于淋巴结、扁桃体等富含淋巴细胞的组织切片要求在2μm以内，不能出现切片过厚和裂隙等，内窥镜取检标本需切出4个切面以上。避免切片出现平行波纹、皱褶破碎空洞、厚薄不均、蜡片卷曲等现象。应对切片机做全面仔细的检查，夹刀的螺丝不能松动，手摇手轮的转速要均匀，不可太猛太快，以免跳刀和机身不稳，切片机应耐心擦除蜡的碎屑及油污，并滴上润滑油保养待用。切片刀一定要保持锋利，达到刀锋无缺口、卷刃，目镜下呈细锯齿纹状，切片刀和蜡块之间的夹角在10度适当。漂片时不能有气泡或皱褶，要充分展平。裱片要求平整，可先在95%乙醇中飘浮，再转入温水，以增加其表面张力，更好地保持切片的平整无痕。水温保持49℃～51℃，水温低，细小的皱褶无法撑开，水温过高会引起组织细胞散开。保持水面的清洁，切忌水面残留组织碎屑，以防止裱片过程中的污染。

　　6、烤片

　　烤片的温度也很重要，我院病理科采用将切片置于温度设置为80℃的烤箱中，20min，这样不会引起组织收缩，也不会出现脱片。

　　7、染色

　　苏木素是世界上唯一的常规细胞核染料。其配方很多，Harris配方最常用。此液的优点是配后即可使用，染色力强，但其极易形成沉淀，易老化的缺点也不容忽视。本室经过长期实践，改良了染液的配制提高了HE染色质量。改进Harris配法总结出以下几点：

（1）将硫酸铝钾容于蒸馏水中，加热使之完全溶解，每克苏木精加10g硫酸铝钾加热煮沸2分钟。

（2）拿离火源后迅速投入碘酸钠0.1g，摇匀冷却（碘酸钠加速氧化，缩短配液过程）。

（3）冷却50～60℃加入甘油。

（4）过夜后加入冰醋酸，暗处保存。配好的液体应是深紫色，发黑。在配好的Harris苏木素中，加入等量埃利希苏木素（埃利希苏木素配法：A：苏木精2g+无水酒精100ml+甘油100ml；B：钾明矾20g+蒸馏水100ml：A+B+冰醋酸5ml）。在苏木素的配制中加入埃利希苏木素作用明显，埃利希苏木素是自然氧化成熟溶液性质较稳定，它能成为Harris苏木素有效稳定剂，使溶液不易产生沉淀及氧化膜，避免沉淀、杂质对切片尤其是对细胞核的污染，达到了稳定助溶、均匀着色的效果；因其缓慢不断补充发色基和助色基，能有效控制因Harris苏木素老化、染色力降低的问题，大大延长了苏木素的使用寿命，平均使用寿命为Harris苏木素的2倍。这两种苏木素起到了优势互补的作用，既能保证染色速度和对组织的选择性能，同时又克服了传统Harris苏木素极易形成沉淀、易老化的缺点[2]。通过对以上关键环节的改良，HE染色质量明显改善，尤其是细胞核染色有很大提高，对于提高病理诊断正确率有明显的帮助。染色要求红蓝分明，对比清楚，严格把握好苏木素染色的配制，每次在染色液配制好后，使用前要进行对比染色。每次染色前必须清除苏木精染液表面的氧化膜，如出现苏木精沉渣必须更换新的染色液。染色过程中盐酸乙醇的分化很关键。如果分化不足，切片呈现一片蓝染，而且影响伊红上色；分化过度时，则细胞核着色过淡，此时可适当延长温水中返蓝时间。

　　8、封片

　　切片封固使用的树胶稠稀应适当。过稀过多易发生溢胶，过稠过少则出现封片不全或出现空泡。封固应在切片上的二甲苯未干时进行，以防止出现色素、溢胶、固缩、龟裂。

　　总之，要提高石蜡切片质量就要规范操作、认真地做好制片的各个环节，并且在实践中不断摸索、总结、创新，这样才能为病理诊断提供有力的技术保障。