今天毛博给大家介绍一个经典而简单的实验。谈到这个实验，毛博就想起了一首老歌“你伤害了我，却一笑而过”。因为这确实是一个通过伤害细胞的方法来检测细胞运动的方式，这就是细胞划痕实验。越是经典越是永不过时，越是简单越有力量！这个实验成本非常低，却可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力,虽然是小米加步枪，但胜过洋枪洋炮，值得一试！

材料仅仅需要6孔板，marker笔，直尺，20微升枪头（灭菌），PBS，和无血清培养基。怎么样？简单吧？

准备工作：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

流程也非常简单：

1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5到1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2、在孔中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

3、第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。

4、用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

5、放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样，拍照。

下面是一系列经典的被伤害了的细胞照片：

0h

6h

12h

24h

大家看到没有，细胞被伤害之后，慢慢地长起来。这个时候，长起来慢是正常的，因为是要覆盖划痕后空出来的部分。我们也正是通过这种方法来检测细胞运动的方式。如果是肿瘤细胞的话，可以用这个实验来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。

细胞划痕实验看上去简单，其实还是有些小细节需要注意的：

在上述实验步骤第3划痕之前，是不用倒培养基的。划痕后再倒掉培养基加PBS清洗后，加无血清培养基。细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。因此是整个培养皿都加培养基的，观察部位是划痕而已。

有童鞋可能要问：为什么要使用无血清培养基？答案是：成分明确，避免血清的成分不稳定。不象血清里面这么多乱七八糟的动作。

那么，细胞划痕实验加的无血清培养基里含有生长因子吗？答案是加。因为主要检验的是细胞的转移能力，所以还是需要这些东西滴。

有些童鞋在做第4步的时候，用PBS冲洗的时候。一下子就把细胞冲散啦。这个很可能是由于细胞本身贴壁不牢，还没等消化，就被PBS冲散啦。贴壁细胞贴壁不牢证明状态非常不好,可能是污染导致，建议不要用于下一步实验。重新复苏吧。这里也有个小窍门，用1ml枪沿6孔板壁成45度打进PBS，避免简单粗暴。