血液肿瘤可能会出现不同基因或染色体片段的扩增，如慢性淋巴细胞白血病可能出现MYC、TERC、GLI1等基因扩增，MM（多发性骨髓瘤）可能出现1q21、11q23和15q22基因扩增等等。这些染色体或基因片段的扩增，FISH检测探针为某个染色体或基因片段（几百kb长），可能会设置相应的着丝粒探针（2-3Mb长）或区域片段探针作为对照。

以MYC基因扩增检测探针（用于MYC基因扩增的检测，含GSP MYC和CSP8两个探针，CSP8为对照）和MM组合试剂盒中的RB1/1q21杂交液（用于1q21扩增和RB1缺失的检测，含有GSP 1q21和GSP RB1两个探针，都具有检测意义）为例。

1.MYC基因扩增检测探针（含对照，判读可类推TERC、GLI1等基因扩增检测探针）

①探针设计：MYC标红色，CSP8（8号着丝粒探针）标绿色

②正常信号细胞：2红2绿

典型异常（阳性）信号细胞： n红m绿（n≥3，若m≥3时，8号染色体多体）

③阈值设定：随机选取10 例以上的正常骨髓细胞涂片或者正常外周血细胞涂片当阴性质控片，每张阴性质控片随机计数200 个细胞，分别计算出现各类型FISH 阳性细胞的数目及百分比，统计百分比的平均值及标准差，阴性阈值设定为平均值+3 倍标准差。

④计数判读：计数200 个细胞，出现2红2绿信号类型的细胞记为FISH 阴性细胞，出现n红m绿（n≥3）信号类型的细胞记为FISH 阳性细胞

a) 若出现FISH 阳性细胞的比例大于阴性阈值时，判断为FISH 阳性；

b) 若出现FISH 阳性细胞的比例小于阴性阈值时，判断为FISH 阴性；

c) 若出现FISH 阳性细胞的比例等于阴性阈值时，应加大计数数目或分析整张片子（≥500个细胞），如果仍小于或等于阴性阈值，视为FISH 阴性；否则视为FISH 阳性。

⑤计数及判读注意：

a) 若无特殊情况，计数时只计数nOmG（n≥2，m≥2）的信号；

b) 若有特殊情况，某一特殊信号出现比例20%以上，最好查阅文献或相关材料验证；

c) 红绿信号都出现的方可统计，若出现大比例（20%以上）没有红色或没有绿色或两者都无的情况，可能是样本或实验条件影响，最好用杂交信号很好的样本行对照再做。

⑥举例：计数时同一信号类型的细胞可用“正”计数表示（温馨提示：为提高效率，针对常见信号类型和阴性细胞可用计数器进行计数，而不常见或类型较少用正号记录）

计数情况：

结果：

3O阳性细胞比例=（150+1）/（55+150+1）=73.3%，大于阈值，MYC基因扩增阳性

此例样本为MYC基因扩增阳性，8号染色体多倍体

⑦阈值参考：参考文献，MYC扩增阈值4%。

2. RB1/1q21杂交液（MM组合试剂盒的杂交液II，两个探针都有检测意义，可类推MDS组合试剂盒的CSP12/D20S108、1q21及1p36异常检测、15q22及6q21异常检测等探针）

①探针设计：GSP RB1标绿色，GSP 1q21标红色，判读时红绿单独计数

②正常信号细胞：2G2O

典型异常（阳性）信号细胞：1G2O（RB1缺失，1q21正常） ，2GnO（n≥3，RB1正常，1q21扩增），1GnO（n≥3，RB1缺失，1q21扩增），n一般等于3。

③阈值设定：随机选取10 例以上的正常骨髓细胞涂片或者正常外周血细胞涂片当阴性质控片，每张阴性质控片随机计数200 个细胞，分别计算出现各类型FISH 阳性细胞的数目及百分比，统计百分比的平均值及标准差，阴性阈值设定为平均值+3 倍标准差。

④计数判读：计数200 个细胞，出现2红2绿信号类型的细胞记为FISH 阴性细胞，出现1绿n红的计为RB1缺失的FISH阳性细胞，m绿n红（n≥3）的计为1q21扩增FISH 阳性细胞

a) 若出现FISH 阳性细胞的比例大于阴性阈值时，判断为FISH 阳性；

b) 若出现FISH 阳性细胞的比例小于阴性阈值时，判断为FISH 阴性；

c) 若出现FISH 阳性细胞的比例等于阴性阈值时，应加大计数数目或分析整张片子（≥500个细胞），如果仍小于或等于阴性阈值，视为FISH 阴性；否则视为FISH 阳性。

⑤计数及判读注意：

a) 若无特殊情况，计数时只计数红绿信号都有的细胞；

b) 若有特殊情况，某一特殊信号出现比例20%以上，最好查阅文献或相关材料验证（P53可能会扩增）；

c) 红绿信号都出现的方可统计，若出现大比例（20%以上）没有红色或没有绿色或两者都无的情况，可能是样本或实验条件影响，最好用杂交信号很好的样本行对照再做。

⑥举例：计数时同一信号类型的细胞可用“正”计数表示（温馨提示：为提高效率，针对常见信号类型和阴性细胞可用计数器进行计数，而不常见或类型较少用正号记录）

计数情况：

结果：

nO（n≥3）的阳性细胞比例=（150+1）/（55+150+1+1）=72.9%，1q21扩增阳性

1G的阳性细胞比例=（1+1）/（55+150+1+1）=1%，RB1缺失阴性

此例样本为1q21扩增

⑦阈值参考：参考文献，1q21扩增阈值5%。

染色体整体数量异常，若减少，判读参考基因缺失；若增多，判读参考基因扩增。

血液肿瘤FISH检测不同于乳腺癌HER2FISH检测，有相应的检测判读指南且大量的文献报道了不典型情况，血液肿瘤FISH检测过程中可能会碰到不典型的情况，建议查阅文献。