AML1/ETO融合基因检测—AML-M2b分型的标志

t（8；21）（q22；q22）是初治急性粒细胞白血病（AML）患者中常见的细胞遗传学异常，大约20%～40%的AML-M2患者有t（8；21）（q22；q22），并且在M2b亚型中发生率高达90%以上。位于染色体21q22的AML1基因与8q22的ETO基因融合，产生AML1/ETO融合基因。AML1/ETO融合基因是转录激活基因，导致细胞不断增殖。临床上t（8；21）白血病好发于青年和儿童（5%～10%），主要与M2型密切相关，并且年龄越小发生率越高。t（8；21）代表预后较好的急性白血病类型，成人患者对治疗反应佳，完全缓解率高，中位生存时间长，但易复发；儿童患者的治疗和预后不如成人患者理想。格列卫也与阿糖胞苷产生了协同效应诱导凋亡，是一个潜在治疗t(8;21)白血病的方法。

Biochemistry (Moscow), 2010, Vol. 75, No. 13, pp. 1650-1666

检测意义：

1. 辅助诊断：作为急性髓系白血病的独特亚型，AML1/ETO融合在M2患者中的发生率20%-50%，在M2b亚型中发生率高达90%以上，是M2b分型的标志。

2. 判断预后：AML1/ETO融合基因阳性是预后良好的标志，患者对治疗反应佳，完全缓解率可达90%，5年无病生存可达50%-70%。但若伴有其他分子学异常，如一条性染色体缺失及del(9)(q22)、KIT、FLT3、AML1-ETO9a剪接变体等更易致白血病生成，且影响预后。

PML/RARA融合基因检测—AML-M3分型的标志

急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）是急性髓细胞白血病（AML）的一种特殊亚型，发病率占急性白血病的6～9%，约占AML发病率的10%。以异常早幼粒细胞增生为主，有粗颗粒和细颗粒两种亚型，在FAB分型里分别称M3a和M3b型。70～90%的APL具有特异染色体易位t(15;17)，是APL特有的遗传学标志，WHO分类中定义APL为AML伴t(15;17)(q22;q12)(PML/RARa)及变型。6%左右的变异易位，包括15或17号染色体与另一染色体间的简单型，累及3条或更多条染色体间的复杂易位或隐匿易位。典型易位使15号染色体上的PML基因与17号染色体上的RARA基因发生相互易位形成PML/RARA融合基因，PML/RARA融合蛋白通过显性负抑制作用抑制早幼粒细胞分化成熟，从而阻断细胞分化导致持续增殖。

检测意义：

1. 辅助诊断：PML/RARA融合基因可见于90％以上的APL中，是APL的特有的遗传学标志。

2. 指导用药：全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（As2O3）能靶向降解PML/RARA融合蛋白，恢复野生型PML和RARA基因功能，解除其对基因转录的抑制，诱导细胞发生分化和凋亡，使APL得到有效治疗。ATRA与化疗联合使用可使APL的完全缓解率达90%-95%，并可使70%以上的患者得到长期生存。

3. 微小残留灶检测：

KamilWolyniec et al.frontiers in oncology, May 2013,Volume 3, Article 124

FISH探针类型

AML1/ETO融合基因检测试剂盒

• GSP AML1（点改成绿）

• GSP ETO（点改成绿）

用于AML中AML1/ETO融合基因的检测，辅助诊断M2b

PML/RARA融合基因检测试剂盒

• GSP PML（点改成绿）

• GSP RARA（点改成绿）

用于AML中PML/RARA融合基因的检测，辅助诊断M3及指导用药全反式维甲酸

FISH方法检测融合基因的优势：

1. PCR法： PCR检测灵敏度高，但只能用于已知转录本的检测，比如PML/RARA融合基因会出现一些不常见的融合形式（有些还伴随着其他染色体易位）。同时PCR方法只能检测很小范围内的基因序列，而当基因序列发生变异时，易出现假阴性结果。此外，标本保存质量、检测试剂灵敏度等因素影响，均可能导致假阴性情况发生。

2. 核型分析：常规核型分析的灵敏度低，有典型的染色体易位可以检测出来，需要对样本进行细胞培养，受制于中期染色体质量；对于不典型易位或隐匿型易位较难检测，需要通过FISH检测。

3.荧光原位杂交（FISH）：可用于外周血或骨髓间期细胞中AML/ETO或PML/RARA融合基因检测，不需要细胞培养或DNA提取。采用双色探针直接靶定断裂点两端，具有敏感，特异，高效和重复性好的特点，它能揭示传统的细胞遗传学分析或由血液或骨髓形态学检查未检出的亚微观异常。检测结果直观，不同信号类型体现易位方式差异，利于临床分析。