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般若波罗蜜!穿越吧,细胞们!
穿越这种事情,是肿瘤细胞最常见的研究的表型之一。当然肿瘤细胞没有任意门,肿瘤细胞靠的是它们的迁移能力和侵袭能力。所谓迁移,主要就是指肿瘤细胞的运动性,简单讲就是从A点活动到B点。
要研究肿瘤细胞从A点运动到B点,那最起码要给它们一个运动的空间吧。于是就诞生了这么一个低成本的试验——划痕试验(Wound Healing),这个实验比较考验人的毅力和细心。实验原理就这么简单,在长满培养孔的细胞中间,用无菌的枪头或牙签划一条线(个人推荐用200ul的枪头,够硬),然后用记号笔在培养孔的外底上标记记号,这点很重要,接着就是定时拍照就行了。你会发觉划痕在长时间生长之后,会慢慢愈合,而药物或其他处理之后,愈合速度会产生变化。这个能说明细胞运动性么?我敢说这个实验有一半是在蒙人,要知道细胞增殖速度快的话,其实也能让划痕愈合,这种沟挤挤也就没有了。
之后一种便宜的试验方法是Transwell,原理是在带有8um小孔的小室里铺上细胞,铺细胞前,先用没有血清的培养基饥饿24小时,小室外部用高浓度血清去诱导,饿得不行的细胞就会奋不顾身地钻过小孔,到小室底孔的外侧,然后将小室内部的细胞擦洗干净,就可以知道有多少细胞穿越了。这个实验告诉我们一个肿瘤细胞的原则——“狗急了也是会跳墙”的。当然也可以使用一些趋化因子来诱导细胞的Transwell,这是衍生实验了。千万不要购买0.4um小孔的小室哦,这就像是用502把肿瘤细胞的月光宝盒粘住了一样,死活是过不去的。0.4um小孔的小室是用来做共培养的。
在Transwell的基础上,又衍生出一种新的试验,因为小孔其实也靠不住,看到过绞肉机的童鞋应该也知道,一大块肉塞进去,只要挤挤,也是能从小孔里出来的。于是就产生了细胞侵袭(Invasion)实验,在小孔上铺一层Matrigel胶,模仿基质膜,要是细胞能穿过这样的模拟基质膜的胶层,就真的是能穿越了。Matrigel的成品试剂盒成本不是很低哦,自己铺胶的话也不是很容易,需要水化凝固等一系列过程。
这些研究的结果主要可以了解到,经过处理(基因敲除或者药物处理后)的肿瘤细胞是否在EMT转化上产生了变化,或者进一步深入研究的话,可以探索一下肿瘤的MMP家族蛋白机相关通路的变化,也有一些微环境的研究会用到这类试验。表型实验其实也是深入研究的简单提示。
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