一、常见误区

（一）、vimentin：是用于明确间叶来源（软组织）的肿瘤的有效标记物，特别是当肿瘤不表达其他标志物时。

 Vimentin 在平滑肌、睾丸肉瘤、甲状腺、前列腺、扁桃体中都可阳性表达。在各种类型的癌中，也可常见Vimentin表达（乳腺癌）

1、Vimentin 是在病理诊断中最常见的过度使用的抗体之一。

（1）：Vimentin协助诊断帮助性不大，任何肿瘤或任何类型的细胞都有可能阳性表达，Vimentin阳性表达并不能支持间叶源性肿瘤/肉瘤的诊断。

(2)：认为“CK- Vimentin”共同阳性表达可助于对肾细胞癌、间叶源性肿瘤或子宫内膜腺癌的诊断这个想法就是个神话，且落伍了（现在已经有许多更特异性的标记物了）。

(3)：Vimentin可以弃用了。

2、Vimentin唯一可用之处为：作为一组抗体用于鉴别诊断子宫内膜腺癌与子宫颈腺癌

（二）、LCA;CD45：是诊断淋巴瘤有用的标记物

1、淋巴瘤或其他恶性肿瘤？

由于淋巴瘤可表现出各种形态特征（如小梁状、巢状、粘液样、花环状、梭形细胞样），有时很难鉴别诊断淋巴瘤或癌，免疫组化有助于鉴别诊断。

传统免疫组化应用

*有些淋巴瘤可LCA阴性，特别是间变大细胞淋巴瘤和淋巴母细胞淋巴瘤

（1）LCA：是常见的抗原；在正常淋巴细胞（B、T或NK细胞系）中阳性表达；在淋巴瘤中阳性表达，但在浆细胞淋巴瘤、R-S细胞（经典型霍奇金淋巴瘤）中不表达；在明确淋巴瘤类型中无须使用LCA，可直接应用各谱系标记物（如CD20+CD3）。

（2）LCA是在病理诊断中最常见的过度使用的抗体之一。

:当大细胞散在分布于小淋巴细胞中时（如霍奇金淋巴瘤），使用LCA以期判断这些大细胞是否为LCA+，是霍奇金淋巴瘤还是TCRBCL？CD30大细胞+，CD20 大细胞+，LCA大细胞-：经典型霍奇金淋巴瘤。

（三）、应用PLAP以明确是否为生殖细胞肿瘤？

1、PLAP:大部分生殖细胞肿瘤表达PLAP（除了精母细胞精原细胞瘤）；但PLAP缺乏特异性，在其他非生殖细胞肿瘤中也可PLAP阳性；常出现背景着色和非特异性染色。

2、新的生殖细胞肿瘤标记物：OCT-3/4(OCT-4),SALL-4：胚胎干生殖细胞转录因子是最有帮助的生殖细胞标记物；其他标记物如NANOG着色类似于OCT3/4；SOX2在胚胎性癌和不成熟性畸胎瘤中阳性表达 。这些抗体的敏感性和特异性均高于PLAP，可取代PLAP。因此，PLAP已完成其历史使命，退出历史舞台。

3、OCT-3/4：是主要POU转录因子，在未分化、多能干细胞中表达，包括胚胎干细胞、生殖细胞。在正常睾丸和卵巢中阴性表达；在生殖细胞肿瘤中仅在生殖细胞肿瘤和胚胎性癌中阳性表达。在体细胞癌中阴性表达（仅少数例外），可在一些大B细胞淋巴瘤中阳性表达（睾丸18%，非睾丸45%）

SALL4是最实用的可广泛表达于生殖细胞肿瘤的标记物。

如精原细胞瘤KIT+,CD30-,OCT3+,SALL-4+；

  胚胎性癌：KIT-,CD30+,OCT3+,SALL-4+；

   卵黄囊瘤：KIT+,CD30-,OCT3-,SALL-4+；

4、需要注意的是，SALL-4最初报道时并不是阳性表达在生殖细胞肿瘤，它能在非生殖细胞肿瘤中阳性表达，特别是胃癌、肝癌（报道示高达15%）。也可表达于卵巢浆液性癌、肺小细胞癌、胃腺癌、肝胰胆管癌、尿路上皮癌（SALL4 expression in germ cell and non-germ cell tumors: a systematic immunohistochemical study of 3215 cases. Am J Surg Pathol, 2014;38:410-420, Markku Miettinen.MD; the zine-finger transeription factor SALL4is frequently expressed in human cancers: association with clinical outcome in squamous cell carcinoma but not in adenocarcinoma of the esophagus, 2016,Ergin Killic）

5、总结：生殖细胞肿瘤标记：1）OCT3/4是很好的生殖细胞肿瘤标记物，但在卵黄囊瘤中不表达；2）SALL4在卵黄囊瘤中明显阳性表达，但卵黄囊瘤由于组织来源的特殊性，还需要借助一组标记物来明确诊断，如Glypican-3，LIN28,AFP。

（四）BCL2能否用于软组织肿瘤如孤立性纤维性肿瘤、滑膜肉瘤、GIST的诊断

Expression of bcl-2 oncoprotein in benign and malignant spindle cell tumors of soft tissue, skin, serosal surfaces and gastrointestinal tract, Am J Surg Pathol, 1998,23,863-872,Suster,Saul.

1、BCL2 在间叶源性肿瘤中的表达缺乏特异性，并不能提示分化和谱系。如在孤立性纤维性肿瘤中BCL2阳性表达，但现在已有更特异的标记物，如STAT6。因此，在诊断间叶源性（软组织）肿瘤中使用BCL2是浪费时间和金钱。

2、应用BCL2是否能支持滤泡中心细胞淋巴瘤的诊断？

（1）BCL2是在病理诊断中最常见的过度使用的抗体之一

1）许多病理医生在面对淋巴瘤诊断时，反应性地就会应用BCL2，错误地认为它是滤泡中心细胞的标记物，但BCL2只是抗凋亡蛋白，在划分淋巴瘤中的应用价值很小。如例淋巴滤泡增大，BCL2弥漫阳性，是否就支持是FL？NO，其他标记物CD5+,CyclinD1+，诊断套细胞淋巴瘤。

2）BCL2蛋白：正常表达在B和T淋巴细胞；在滤泡中心B细胞中正常情况下不表达，促进细胞凋亡，将功能低下的细胞排除。在滤泡性淋巴瘤中，滤泡中心通常异常表达BCL2蛋白；但许多淋巴瘤亚型也表达BCL2（非BCL2基因易位相关）；不要将BCL2的免疫反应性与BCL2重排混淆了。

3）滤泡中心细胞分化的证据：免疫组化标记物：CD10,BLC6,HGAL,LMO2；分子标记物：BCL2基因重排，不是BCL2的免疫反应性。

3）BCL2主要用途：

对滤泡细胞淋巴瘤（BCL2+）和反应性滤泡增生（BCL2-）；

诊断Burkitt淋巴瘤（BCL2-）；

当BCL2异常缺失时支持T细胞淋巴瘤的诊断。

（五）小圆细胞肿瘤是否为促纤维增生性小细胞肿瘤（EWS-WT1融合为特征），可通过免疫组化WT1来证实？

1、促纤维增生性小细胞肿瘤：高度侵袭性肉瘤由小圆肿瘤细胞、周围明显的促纤维增生性间质组成，呈多形性分化。多发生在腹腔，以EWSR1-WT1基因融合为特征，WT1羧基端发生异位融合。CK+,Desmin+,NSE+。

2、市面上的WT1抗体有2种类型，一种是针对氨基端的，是较为常见的抗体类型，但这种抗体在促纤维增生性小细胞肿瘤中呈阴性表达；如果它在小圆细胞肉瘤中阳性表达，更与CIC-DUX4易位的圆细胞肉瘤相关（95%病例阳性表达）。另一种是针对羧基端的，较少见，只有这种抗体才能在促纤维增生性小细胞肿瘤中呈阳性表达。

（六）鼻活检NK/T细胞淋巴瘤，如果EBV-LMP1免疫组化阴性表达，则不支持诊断？

1、事实上，免疫组化LMP1对于检测肿瘤中EBV效果并不好，常呈假阴性，优选ISH EBER检测。

EBV基因在肿瘤中的表达情况

注：LMP1在NK/T细胞淋巴瘤和NPC中的表达情况不一（阴性或弱阳性，甚至仅mRNA阳性）；EBNA2免疫组化可用于III型E肿瘤的EBV检测

2、EBV-LMP1抗体：广泛使用的EBV抗体是LMP1；在I型Burkitt淋巴瘤中不表达，在所有EBV相关性淋巴瘤中均可阳性表达。但EBV-LMP1表达水平低下通过免疫组化较难检测出来，因此阴性结果也不能排除无EBV感染。EBER原位杂交检测可检测出EBV，简单，廉价。LMP1可在经典型HD（EBV+）和淋巴瘤样肉芽肿中阳性表达，在经典型HD中，LMP1呈一致强阳性表达，可替代EBER ISH用于经典型HD的诊断。

3、EBNA2抗体：EBV潜伏感染III型的各类肿瘤可应用EBNA2抗体检测EBV；注意有些EBV相关性肿瘤（如PTLD和老年性EBV+DLBCL）可有II型和III型EBV潜伏感染，因此EBNA2阴性表达并不能完全排除非EBV感染。肿瘤EBNA2表达也可能代表其他意思：提示有免疫缺陷病（全身或局部）

（七）淋巴结改变看起来像弓形虫淋巴结炎，可能通过弓形虫免疫染色来证实？

弓形虫淋巴结炎：由弓形虫原发性感染导致（猫粪弓形虫卵或未煮熟肉的弓形虫囊）

组织学线索：明显的反应性滤泡增生；明显单核B细胞增生；孤立或小簇上皮样组织细胞，有些浸润生发中心。在增大的淋巴结中较少见到弓形虫病原体，在淋巴结行弓形虫免疫染色并不会阳性表达，以提示弓形虫淋巴结炎，因此进行免疫染色是费时费钱。弓形虫淋巴结炎可能是宿主对感染产生的反应，而不是由于弓形虫直接感染淋巴结。与弓形虫淋巴结炎不同，其他脏器弓形虫感染时可见弓形虫。

（八）乳腺癌伴大汗腺分化是否可能过AR免疫染色来证实？

大汗腺细胞（正常或化生）几乎都呈AR+,但乳腺非大汗腺上皮也常AR+。当AR-时提示无大汗腺分化，但AR+对预测大汗腺分化的价值不大。

（九）与HPV相关的鳞状细胞癌是否可通过p16免疫染色证实？

1、在头颈部癌中，p16作为高危型HPV的替代标记物，仅适用于口咽部，具有高敏感性（-100%）。口咽部癌HPV感染率高（>50%）。

2、头颈部鳞状细胞癌的免疫组化p16

在口咽部，p16可用作HPV的替代检测标记，与HPV转录活性和疾病进展相关。而在其他解剖部位中p16的特异性较低，会出现较多假阳性（在非口咽头颈部HPV感染率不足20%）。如上鄂鳞状细胞癌p16+，但HPV-（p16假阳性）

3、免疫组化p16是否有助于鳞状细胞癌与反应性鳞状上皮增生？NO。因为良性鳞状上皮有时也可p16+，如腮裂囊肿中50%p16+。

（十）如果癌呈TTF1强+，则一定是来源于肺中甲状腺？

1、例如肝脏转移性腺癌，TTF1强阳性，是转移性肺癌吗？但组织学形态不典型，其他免疫组化结果CDX2+,CK20+，NapsinA-，诊断转移性结肠癌伴异常TTF1表达。

2、“器官特异性”转录因子对于判断癌的来源很有帮助，但并不完全特异。异常表达可见于卵巢癌表达TTF1，肺癌表达PAX8或CDX2等。

（十一）如果腺癌表达为肠的免疫表型，则一定是来源于肠？

1、如宫颈腺癌，免疫表型呈典型的肠型表达：CK7-,CK20+,CDX2+,SATB2+,PAX8-,P16-,但患者未发现其他部位有肿瘤，因此诊断为宫颈肠型腺癌。不能仅根据免疫表型来判断腺癌来源。

2、肠型腺癌能发生在身体的许多部位：唾液腺、头颈粘膜如舌、喉，肺、胸腺、卵巢；

3、发生在胃肠道外的肠型腺癌免疫表型：CK20明显阳性；CK7可阳可阴，如果CK7+可能提示非胃肠道来源；肠源性标记物：CDX2，Villin,MUC2+;STAB2可阳；器官特异性转录因子常阴性如TTF1在肺肠型腺癌中阴性表达。

（十二）是否被H-caldesmon免疫染色所蒙骗？

H-caldesmon：主要表达在平滑肌和肌上皮细胞；H-caldesmon免疫染色有助于诊断平滑肌肿瘤尤其是平滑肌肉瘤（具有高度特异性）。但我们科室有时H-caldesmon有时在所有梭形细胞中都阳性表达，缺乏特异性，这与文献报道相反。查找文献发现，H-caldesmon有2家公司不同克隆号的抗体，Ventana antibody(E89)敏感性100%，特异性仅8%（我院使用的抗体）；而Dako antibody(clone h-CD)敏感性54%，特异性97%，因此要选择Dako 的H-caldesmon抗体。

（十三）Myogenin是诊断横纹肌肉瘤最好的标记物？

1、例如舌肿瘤切除考虑为梭形细胞横肉，免疫标记SMA+,Desmin+, Myogenin仅少数阳性（-1%），是染色无特异性吗？但MyoD1阳性，支持诊断梭形细胞横肉。

2、骨骼肌分化的肿瘤免疫标记物：

1）Myoglobin：敏感性非常低

2）MyoD1:Myogenic转录因子，高度敏感性和特异性，但在石蜡包埋的组织中表达不一致。

3）Myogenin(myf4)：另一种Myogenic转录因子，具有高度敏感性和特异性，值得信赖，慢慢成为诊断横肉的免疫标记物。

3、腺泡状横肉：myogenin弥漫阳性；胚胎性横肉：myogenin部分肿瘤细胞阳性；梭形细胞横肉：myogenin阴性；MyoD1+,Desmin弥漫+。

4、梭形细胞横肉：是一种横肉少见亚型，常有MYOD1基因活性突变，大部分发生在头颈部，组织学特征为长梭形交错排列相对一致的细胞，胞质较淡染，Desmin+,Myogenin染色较局灶，MyoD1（单克隆兔抗，如EP212）染色弥漫阳性。

5、Myogenin通常在诊断横肉中也很有帮助，但在梭形细胞横肉中，需要加用MyoD1抗体，否则易漏诊。

（十四）乳腺或尿路上皮中GATA3是可依赖的标记物？

1、GATA3：GATA3结合蛋白是GATA家族的转录因子，这个分子蛋白识别G-AT-A肽序列，靶向基因促进和活化或抑制这些基因。

2、GATA表达分布广泛，正常表达在：乳腺小叶和导管上皮；泌尿系统：肾盂尿路上皮、子宫和膀胱、肾集合小管和终末导管；皮肤：表皮、皮脂腺、毛囊、大汗腺腺体，外分泌腺腺体+/-/；女性生殖道：宫颈上皮；滋养叶细胞；副神经节，淋巴细胞亚型。

3、GATA3作为乳腺标记物：

1)常用于判断乳腺来源的癌:BRST2(GCDFP-15),mammaglobin,均为50-60%病例阳性表达，常局灶阳性，在3级乳腺癌中常不表达。

2）GATA3在>90%乳腺癌中阳性表达，几乎所有肿瘤细胞均阳性，比BRST2和mammaglobin的敏感性更高；在ER阳性肿瘤中100%阳性表达；在HER2阳性肿瘤中-80%阳性，在三阴性乳腺癌中50-70%阳性。

3）GATA3+P40:倾向尿路上皮癌，但不能排除鳞状细胞癌；

   GATA3+ER：倾向乳腺癌

4、例如在阑尾表面发现小管结构，是来源于尿路上皮还是输精管？GATA3+，是否提示小管结构是来源于尿道？但PAX8+，因此是输精管分化，但目前尚未见GATA3在输精管分化表达的相关文献报道。

5、GATA3在正常组织中广泛表达，在不同肿瘤类型中其免疫反应性也各不相同，因此对GATA3的免疫染色的解释要小心谨慎一些。

（十五）淋巴造血系统标记物意外表达在上皮性肿瘤中，有时有帮助，有时则是陷井

1、 CD5和胞腺癌

CD5是T淋巴细胞标记物，在胸腺癌中常阳性表达，但在其他癌中较少表达，常支持胸腺来源的鳞状/低分化癌。

2、CD43和涎腺腺样囊性癌、

CD34是T 淋巴细胞标记物，常在涎腺腺样囊性癌中阳性表达，但在涎腺其他类型腺性肿瘤中较少阳性，因此有助于诊断腺样囊性癌。

3、CD20和甲状腺癌

CD20是最常见的B细胞标记物，在乳头状甲状腺癌和侵袭性甲状腺癌中约10%阳性表达，但并不会误导诊断，因此甲状腺癌的组织学形态特征与淋巴瘤不同。

4、TdT和PAX5在Merkel细胞癌中

1）Merkel细胞癌是皮肤小细胞神经内分泌癌，肿瘤细胞具有特征性的核圆形、气球样，染色质细腻，但与淋母类似。

2）Merkel细胞癌免疫表型：CK+（常核旁高尔基体+），SYN/CgA+,CK20+,淋巴标记物意外表达PAX5和TdT，因此，形态学加PAX5和TdT+可能会考虑B淋母的诊断。

3）正确诊断Merkel细胞癌的线索：粘附性生长，像神经性肿瘤一样器官样生长并由纤维血管分隔。

5、PAX5和肺神经内分泌肿瘤

PAX5常在肺高级别神经内分泌癌（小细胞/大细胞 ）阳性表达。在不典型类癌中有时阳性表达。在小细胞癌中PAX5阳性表达有时会误诊断淋巴瘤。

6、CD21/CD35和鼻咽癌

CD21和CD35是滤泡树突细胞的标记物，部分B细胞和B-淋巴瘤也可阳性表达，罕见情况下，未分化鼻咽癌CD21和/或CD35阳性表达，因此，NPC有时会误诊为滤泡树突细胞肉瘤，尤其是在淋巴结转移情况下。要意识到偶尔也可见淋巴造血标记物在上皮性肿瘤中的阳性表达，以免误诊。

（十六）全自动免疫组化机有时也会出错，如果有疑问需要重复染色

有时出现的问题原因也可能源自全自动免疫组化机。

1）一张或大部分切片出忽意料地不表达。

2）着色不均。

3）抗体交叉污染。

4）由于加热不当抗原修复不佳、探针添加不当造成假阴性着色。

5）部分区域未着色。

可能导致着色弱阳性的原因

1）组织处理不当，如福尔马林固定时间延长

2）抗原修复不充分

3）试剂滴加不均匀