作者：徐开军（云南省第三人民医院病理科）

病理诊断的不断提高离不开病理技术的发展，虽然免疫组织化学技术及分子病理学诊断技术日趋成熟及广泛应用，使得病理学诊断水平及研究更加精准。但作为传统的染色技术——特殊染色，因实用性目前仍在病理学诊断及研究中占据重要的地位。

如何做好病理特殊染色？

特殊染色特点

1、染色时间短、操作简便：如：HP染色、VG染色、刚果红染色等；

2、染色方法具有一定特异性；

3、染色多重选择性：

①一种染色方法可染不同物质：

如PAS染色可显示糖原、真菌、黏液等；醛品红染色可显示弹性纤维、肥大细胞等；

②一种物质可用多种染色方法：

如弹性纤维：可用醛品红法、间苯二酚碱性品红法等进行染色；

③一种方法可用多种复染背景：

如：含铁血黄素染色可用核固红、中性红、伊红复染；六胺银染色可用亮绿、橙黄G复染。

4、试剂价格低廉（自配）；

5、实用性/不可替代性：

肝脏穿刺：Masson、Gomori、Perls；肾脏穿刺：PASM、PAS、Masson。

特殊染色局限性

1、组织细胞内成分复杂

①新型隐球菌：需做AB、PAS染色联合判别；②糖原：需做阴性对照方可进行判读。

2、组织的固定受限

石蜡切片：能较好的保存组织形态结构，但被检物会受到各种因素的影响或被破坏。

冰冻切片：能较好的保存各种酶、糖原、脂质等物质，但组织形态结构及阳性物质定位比较差。

做特染的组织往往都是经过甲醛固定，常规制片后的判断。难以再次做冰冻切片。

3、所选染色方法特异与否

特异性高，敏感性降低，假阴性升高。

4、染液用量小，保存时间短，一些液体容易失效。

如氢氧化银氨、核固红等

特殊染色室内质量控制

一、规定、制度

三级医院评审标准要求

二、对照的设立

对照设立是室内质量控制的首要条件。主要对照为：阳性对照、阴性对照、内对照。

主要是为了确保染色流程的准确，染色试剂的有效，最终证实染色结果的可靠。

1、阳性对照（最基本、有效的要素）：已知含有所染物质的组织。

日常工作中收集阳性对照组织。每批次染色加阳性对照组织。特别是病原微生物染色。

2、阴性对照：已知不含有所染物质的组织。

一般而言，特染阳性对照结果比阴性对照结果更有意义和价值。

阴性结果可能缘于：

固定液的影响、物质本身含量低、组织处理过程的影响、染色方法不敏感等引起。

3、内对照

①组织自身物质：能用内对照的组织很少，主要靠阳性对照。

②消化/阻断对照：如PAS染色阳性：糖原、黏液

PAS+消化:阴性—糖原；PAS+消化:阳性—黏液。

三、染液的配制、保存

1、选择染色的方法：

①方法：特异性、敏感性（最为重要）；②流程：简单、快捷；③试剂：易购买；④结果：易保存。

2、染液的配制：

①选择合格的试剂（配好染液的关键）；②严格按照染液配制要求（《临床技术操作规范 病理学分册》）进行配制。

3、染液配制后的验证：

①自行配制及购买试剂盒试剂均应做阳性、阴性对照；②验证有效后必须在试剂瓶上贴标签，标注清楚：试剂名称、配制日期、有效期；③改良染色法需经过大量病例来验证其准确有效性。

4、染液的保存：

①大部分染液2-8°C冰箱保存；②部分染液室温可保存较长时间：如苦味酸

③少许染液不可冰箱保存：如硫酸耐尔蓝；④部分染液需临用前配制：如VG。

5、染色试剂性质了解：

特殊染色试剂所使用有苦味酸、铬酸、硫酸、苯酚等许多有害物质，不仅要做好个人的防护，同时废液也不可随意倾倒。

四、染色中的控制

1、染色时间的掌握：

①染液使用的长短

如含铁血黄素染色法中亚铁氰化钾液使用一段时间后变色应弃之，防止假阳性反应。

②染色温度

如PAS染色中高碘酸氧化的温度过高容易引起假阳性。

③切片厚度：一般为4-5um， Masson染色6um；尼氏小体染色6-9um

如脱黑色素切片过厚，容易引起脱片。

2、染色中镜下的观察：

① Masson染色：磷钨酸分化时在镜下观察控制至肌纤维清晰为止。

②PASM染色：六胺银工作液中20min后镜下观察，镜下观察真菌或基底膜呈黑色终止，过染不可逆，无法修复。

③刚果红染色：分化时需镜下严格控制。

五、染色结果的判读

结合所选染色方法的表达结果、对照染色的结果、生物学形态判断。 

1、所染阳性结果表达是否定位准确

2、组织阳性对照或内对照是否有效

3、判断结果应准确认识生物学形态

室内质控是保证结果准确性及稳定性不可缺少的重要环节。

来源于：病理染色技术