组织发脆，这是我们经常碰到的问题，一直以来，我们都认为，由于脱水过度，导致组织发硬、发脆，镜下细胞打滚。然而，日常工作中很多组织发脆的现象无法用组织脱水过度来解释，甚至相反，因此，我们设计了二种脱水时间和二种切片方法，探讨组织发脆的原因。

一、材料和方法

1、组织：固定充分的小白鼠的肝；人的子宫肌瘤、肠癌、和胃粘膜小组织；组织厚0.2cm，胃小组织0.1×0.1cm。

2、方法：

2.1组织处理时间：

第一组脱水时间：

（1）75%酒精30分钟；（2）85%酒精30分钟；（3）95%酒精30分钟；（4）95%酒精30分钟；（5）100%酒精30分钟；（6）100%酒精30分钟；（7）二甲苯30分钟；（8）二甲苯30分钟；（9）浸蜡30分钟；（10）浸蜡60分钟；（11）浸蜡120分钟。

第二组脱水时间：

（1）75%酒精2天；（2）85%酒精3天；（3）95%酒精4天；（4）95%酒精4天；（5）100%酒精8天；（6）100%酒精8天；（7）二甲苯30分钟；（8）二甲苯30分钟；（9）浸蜡30分钟；（10）浸蜡60分钟；（11）浸蜡120分钟。

2.2切片方法：

全部组织包埋后，采用放在冰上冷冻后切片、冰水中冷却切片和不冷却切片三种方法。

二、 结果：

第一组小白鼠的肝短时间脱水后蜡块用冰冷却方法切片

第二组小白鼠的肝长时间脱水后蜡块用不冷却方法切片

第一组胃粘膜短时间脱水蜡块用冰冷冻方法切片

第二组胃粘膜长时间脱水蜡块用冰冷冻方法切片

三、结果分析：

我们从实验中发现，组织发脆与脱水时间短有关系，还与蜡块冷却的温度过低有关。

从冰上冷冻后切片一组发现，组织脱水时间长，切片质量好，但少量细胞丰富的组织细胞打滚、发脆，特别是小白鼠的肝，难以切片。而从冰水中冷却切片一组发现，组织脱水时间长，切片质量好，除小白鼠的肝外没有出现组织细胞打滚、组织发脆的现象。而不冷却切片的方法，适用于长时间脱水的小白鼠的肝。

组织脱水时间短，组织内含有少量水：酒精、二甲苯不能完全渗透到细胞间去，导致石蜡能够渗透到组织内但不完全，细胞与细胞间的粘附性降低，石蜡不能彻底起到支撑作用。细胞丰富的组织切片时发脆，镜下观察细胞打滚、呈梯田样；子宫肌瘤由于蜡没有浸透，无法切片；脱水严重不足时切片不全、破碎，切片后蜡块内陷。

小白鼠的肝特别细腻，由于蜡没有彻底渗透到组织中去，切片时虽能切平整，但是切出来的片子很容易拱起，也很容易脱片，镜下细胞出现打滚、呈梯田样或细胞结构不清；如果脱水时间略长一点，组织脱水、浸蜡充分，切片的时候（用冷却的方法）就会呈粉未状。这是一直以来我们误认为脱水时间长组织发脆的原因。不冷却切片，就能切出薄而平整的优质切片。

细胞丰富的组织由于冷却温度过低，才会导致组织发脆和细胞打滚，其原理应该和冰冻切片时冷冻温度过低，肝、甲状腺、脑等组织会发脆相同。因此，不同的组织应该选择不用的冷却温度切片：细胞丰富的组织，可采用冰水冷却切片，肌肉、脂肪较多的组织可采用冰上冷冻的方法，特别细腻的组织，可采用不冷却的方法切片。

所以，我认为组织脱水时间长并不会导致组织发脆，组织固定不佳，组织脱水时间不足（组织过厚；一个包埋盒内组织太多），第一道酒精浓度过高和冷却温度过低才是导致组织发脆、细胞打滚的真正原因。而包裹小标本的纸太厚、透水性差、用二层纸包等都是造成小标本发硬发脆的主要原因。当然切片刀不锋利、切片厚也会引起细胞打滚。因此，应该分析产生组织发脆的真正原因，改变固定、取材、脱水流程或切片习惯，才能解决组织发脆、切片细胞打滚的问题。

【来自公众号 中华病理技术网】

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