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外泌体,从一窍不通到略知一二
来源:实验万事屋
我叫林平之,是实验万事屋的万年NPC,好吧,最近老板开始迷恋外泌体了……但我并不知道这都研究的是啥……
莫愁:外泌体么,简单点讲就是:“老司机,带带我……”。大概就是在细胞内部由细胞内多泡体形成的一个囊泡,装载了一堆乱七八糟的东西,然后分泌出体外,然后进入另一个细胞,把这堆乱七八糟的东西卸车的一个过程。
一般来说,这个老司机带上车的都是些miRNA和mRNA,不过大概也有lncRNA,有的时候不巧也会有点DNA。下面就是外泌体里一般的RNA分布,有蛮多miRNA,所以老司机外泌体有可能会参与某些调控机制。
要研究外泌体,大概先要了解外泌体多大,大概……这么大吧。
好吧其实没那么大,大概外泌体大小跟病毒差不多大,反正是蛮小的了。
所以外泌体的研究方法基本是这样的:
首先,用无外泌体的血清培养基进行培养,否则就干扰了。
接着,就是低速离心去除细胞。
然后通过过滤,刚刚也说过大小了哈,过滤后,把细胞微泡去除掉,剩下的就是外泌体了。
接着高速离心,富集外泌体:
然后,研究的套路一般都是进行外泌体的鉴定,可以通过电镜,或者WB来鉴定,因为外泌体是有标志物的,像下面这样:
这时候可以选择细胞内质网的特异性分子Calnexin来作为阴性对照。
用外泌体也可以做流式分析,但是,外泌体做流式分析,但是,你要记住外泌体很小,跟病毒差不多大。所以做流式前要用包被了抗体的珠子(beads)先结合上外泌体,然后进行流式的分析,就像这样:
其实关键还是在外泌体内部的那些miRNA和mRNA的抽提和鉴定,研究外泌体的具体机制,还是靠上车的这堆货。
现在大概了解外泌体研究要做些什么了吧?
…李莫愁博士的分割线…
华丽丽:我已经分割了很多次了,是时候下来跟大家说几句了。外泌体的研究,五年内持续稳步上涨:
国内研究呢?还是比较慢的,所以鲁老板会对这个东西有兴趣。
估计又会涌现出一批批的外泌体课题来,好了,大概就给你们补课补到这儿了,今天就策到这里吧。
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