果冻晶莹剔透，口感QQ的，其实果冻的原料琼脂糖，也是我们平时用来跑电泳的材料，琼脂糖凝胶电泳实验常用以DNA切胶回收，DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒等是否切开。今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小细节。

第一步：胶液的制备

称取0.4g琼脂糖，置于200ml锥形瓶中，加入50ml 0.5×TBE稀释缓冲液，放入微波炉里加热，直到琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。总液体量不宜超过锥瓶的50%容量。否则会溢出来的。毛博就吃过这个亏。还要擦洗微波炉。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。

第二步：胶板的制备

倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀。东一块西一块的。果冻做出来就不好看啦。速度也不可太快，否则容易出现气泡。果冻做出来里面都是气泡。怎么吃呀？待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶。

第三步：加样

注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。果冻下面被戳个窟窿，还怎么吃呀？

第四步：电泳

加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60-80V，电流在40mA以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时，停止电泳。

第五步：染色

未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml的EB溶液中，室温下染色20-25分钟。

第六步：观察和拍照

在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。DNA存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。

除这些细节之外，还有一些注意事项：

1、酶切时所加的DNA溶液体积不能太大，否则DNA溶液中其他成分会干扰酶反应。

2、酶活力通常用酶单位（U）表示，酶单位的定义是：在最适反应条件下，1小时完全降解1 mg λDNA的酶量为一个单位，但是许多实验制备的DNA不象 λDNA那样易于降解，需适当增加酶的使用量。反应液中加入过量的酶是不合适的，除考虑成本外，酶液中的微量杂质可能干扰随后的反应。

3、市场销售的酶一般浓度很大，为了省着点儿花，使用时可事先用酶反应缓冲液进行稀释。另外，酶通常保存在50%的甘油中，实验中，应将反应液中甘油浓度控制在10%以下，否则，酶活性将受影响。

4、观察DNA离不开紫外透射仪，可是紫外光对DNA分子有切割作用。从胶上回收DNA时，应尽量缩短光照时间并采用长波长紫外灯(300-360nm），以减少紫外光切割DNA。

5、EB是强诱变剂，还有中等毒性，就是有致癌性。配制和使用时都要戴好手套。尽量不要把EB洒到桌面或地面上。如果真的不幸洒到桌面或地面上了，凡是沾污了EB的容器或物品必须经专门处理后才能清洗或丢弃。

6、当EB放太多了，胶染色过深，DNA带看不清的时候，可将胶放入蒸馏水冲泡，30分钟后再观察。