可能大家都遇到过这样的窘境，经费不足，但是又要做深入机制。那怎么办呢？不能做Pulldown，Y2H，CoIP，芯片等等等等大实验，那怎么做机制啊！？遇到这样的情况，大家基本上都会束手无策。

有什么办法么？办法倒也不是没有。经费少，机制也有便宜的做法……

用小林子要研究的这个耐药相关基因作为例子，给大家介绍一下李莫愁师姐教小林子的应对办法吧。

第一点：做好功课

　　小林子手里的这个基因的表型是与肠癌耐药相关的，具体机制没有报道过。但这是一类家族蛋白，同源的一些蛋白是有过报道的。Bingo，搜一下这些同源蛋白研究过的文献这是第一步。很多情况下，这样的文献搜索可以帮你缩短寻找通路的时间，同时也是对下一步研究的一个提示。

第二点：共表达试验

　　如果研究的未知基因是一个转录因子，或者未知基因下游通路中有转录因子活性，那研究它与下游基因的共表达是显而易见的工作。筛选一些可能与耐药相关的基因，研究敲减未知基因后的下游基因变化，就可以做一点浅表的耐药机制研究了。

第三点：激酶的话怎么做？

　　如果未知基因可能是一个激酶，就需要做一些磷酸化的Western Blot，那也是选择明星的通路，例如AKT、ERK等等。一旦建立了联系，就像是钓到宝了一样。你要问有这么大的可能性，一筛就中的么？我要告诉你的是，这是在做好第一点的前提下。

第四点：抑制剂实验　

　　如果未知基因已经联系上了明星通路，也联系上了耐药的明星分子，那怎么继续呢？那就用通路抑制剂抑制后，看耐药变化，将三者串连在一起。那样一篇简单机制的文章就这么诞生了。

　　这样算下来，也就是做点基因敲减，qPCR和Western，最多加一点抑制剂。除去人工（小林子这样的免费劳动力），成本最高的也就是抗体，总体来说不算是很高，也能解决目前基本的问题了。