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实体瘤基因突变检测
2014-01-12 00:44 阅读(595) 评论(0) 分类：分子技术
目前开展较多的实体瘤基因突变检测有GIST的c-kit和PDGFRA；肺癌的EGFR、K-ras；结直肠癌的K-ras和B-raf等。 首先大家必须明确检测的目的和意义，都是和相应的靶向治疗有关。例如在结直肠癌中， EGFR酪氨酸激酶抑制剂和抗EGFR单抗（西妥昔单抗(cetuximab）对具有野生型k-ras 基因的肿瘤的生长具有抑制作用, 从而使患者的预后得到改善。而对于具有k-ras 基因突变的结直肠癌患者，则不能从中获益。 因而, 结直肠癌的患者进行靶向治疗，必须检测k-ras基因的突变状态。 目前常用的基因突变检测方法主要是直接基因测序法和实时荧光定量PCR法。我们科内多年来一直是应用直接测序法，效果很好。目前也正在尝试real time PCR法。还是以k-ras 基因为例，因为突变主要集中在外显子2中第 12、13编码子上，因此方便设计引物。 基本的步骤： 1）基因组DNA 提取：尽量选取含肿瘤多的蜡块（避免出血坏死处），10微米*3，切卷放入Ep管。（只要组织固定处理得当，较多的穿刺组织也足够提取DNA）采用试剂盒提取，很方便 2）PCR直接扩增。具体的基因PCR条件有所不同。（我们科里用的引物都是根据文献自行设计的） 3）琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增片段。（PCR产物的质量决定了测序的成败） 4）测序（目前我们科是送到专门的测序公司，高效） 步骤说起来不难，具体实施起来在DNA提取、PCR反应等方面会有一些问题，需要结合自身工作条件进行优化。
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