一、超时原因：

1、苏木素、依红的染色时间是这次比赛超时的最根本原因。由于大会提供的苏木素需要染2.5-3分钟，依红染1分钟，而一般选手在家时往往苏木素只需要1分钟，依红1秒钟，这就需要选手根据这个变化，加快平时比赛所用各种步骤的速度，因为苏木素依红的时间是不能省的，如果你还是按原来的速度来操作，时间肯定来不及。

2、过于追求完美：很多选手对切片的要求过高，一张一张反复切，希望能切出一张完美的片子，这个观点是错误的。一般来说，前面一二张往往是最好的，因为越切到后面，越感到后面的片子没有前面好，心情会越来越紧张，最后最多也只能切到和前面差不多的片子，大多数是比前面的差。

3、有的选手错误的动作太多：切片干燥了后才固定；用电吹风加热切片，还一张一张吹；用电吹风吹干片子等等。这些动作不仅延长了操作时间，还且对质量有着致命的影响：细胞退变，切片后立即固定，细胞形态好，这是所有步骤的关键，而且可以节省时间。电吹风加热切片，如果是一张切片，可能会快，三张切片一张张吹，就未必会快，而且会造成三张切片染色深浅不均匀，因为你加热的时间、电吹风的热量不会稳定。电吹风吹干片子更不可取，酒精脱水，也就几秒钟就完成了，不会不干净，你用酒精脱了还用电吹风吹，增加啊不少时间，主要是增加了细胞收缩。

二、切片质量

1、冰晶多：这是最普遍的现象，主要原因是冷冻速度慢：（1）有的选手将标本托盘放在外面，这是错误的，热的托盘会延长冷冻的时间，增加冰晶的产生。（2）胶放得太多，同样也会延长冷冻的时间。（3）没有用冷锤压（厂家没有提供）。

2、细胞退变：切片粘在玻片上要立即固定，固定时间越快，细胞退变越少，从固定速度上看，甲醇是最快也是最好的。还有选手用加热方法固定，更错，细胞核结构几乎看不清。

3、细胞收缩：

用电吹风吹或用丙酮固定，都会引起细胞收缩，但如果没有对照，不是很明显。

4、染色较浅：

主要是苏木素的染色时间和在家不一样，这就要求选手的基本功了，很多选手不习惯，由于前面切片花费时间太多，染色来不及或经验不足，对深浅肉眼观察不准确。其实这时应该用显微镜观察一下，这只要花费十几秒钟。

5、切片有很多空洞：

主要是肝脏，由于动物冷冻后发脆，粗切时肝组织呈大块大块的粉状，肝切片上有很多的小白点（即肝组织掉出），这就要求我们多细切几下。

6、皱折：

主要是选择展片的方法不一样造成：有的人用毛笔慢慢拉下在切片台上，然后用玻片粘；有的选手用毛笔在组织块成小卷后拉开，然后用玻片粘；这二种情况在组织好切，心情平各时，也能做出好片子。但在比赛时，肾上腺素较高，手多多少少会颤抖，容易造成拉力不均匀，导致切片出现小皱。还有选手组织边上留胶太少，会造成组织边缘出现皱折。

7、组织发脆：

由于本次比赛选用了三种组织：肝、肾、肠。为了使所有组织都能好切，并且不影响后面选手比赛。所以规定冰冻切片机的室温不能改变，-18度。快速致冷后的肝组织会明显发脆，如何解决？有的选手不懂，就这样切下来了，切片上就会有很多的裂痕。有的选取手用手去摸，较果好一点，但有可能全部去除，会有少数地方出现裂痕。解决的方法：把样本头温度调至-14度即可。现在很多冰冻切片机（双压缩机）都有这功能（切片机里的OT就是样本头的温度）。徕卡的1950更明显，把那头的功能单独做出来，当然买的时候千万注意要配制，因为1950的很多功能都是选购的，如果你买标配，会有一些很实用的功能没有。也可以将冻好的组织放室温略复温一下。

8、包埋面：主要是肠要竖起来包，只有在样本托是冷的情况下，才容易将肠竖起来，而且肠间质水份不多，不需要冷锤压。

三、心态

 很多选手过于在意比赛的成绩，导致心情太紧张。比赛比的就是心里素质，如果你太在意，就会发挥失常。有的选手手在发抖，还有的紧张得满头大汗，这都不会取得好成绩。只要你和日常工作时一样做，就会有好成绩。我科派的选手才工作二年，做冰冻也就三个多月，一方面是想让她出去学习学习，另一方面她没什么压力，一个新手不抱什么希望，只要完成任务就行，所以她只用了14分钟就全部完全了，而且拿了二等奖。一颗平常心，也是比赛成功的诀窍。

四、过于自信

 也有少数选手过于相信自己的水平，忘记了强中自有强中手，你的切片质量在你本地可能是最好的，但不等于在全国是最好的，所以应该多向别人学习，多看看别人的片子，找出自己的差距，没有最好，只有更好。学习是无止境的，只有向别人学习，才会进步。过于自信会固步自封，停止前进。

四、冰冻切片的注意事项

1、细胞核的结构：这是病理诊断的关键，要想有一个正确的诊断，必须要有很好的细胞核结构，要求没有退变，没有收缩，核内没有空泡，染色质清晰可见。这也就包含了颜色要染得好，过深或过浅的染色都会影响诊断的判断。根据这：干燥后固定，加热等方法都会影响细胞核结构，所以都不可取。然后就是要组织不发脆，细胞没裂痕（这就要求使用样本头的功能，把组织加热至-14度，用手摸不可能全部解决）。最后就是片子要厚薄适中，太厚了也会影响效果（比赛一般5-7微米），太薄了会影响染色效果，切的慢的选手可选择5微米，但如果是切得很快的选手可选择7微米，比赛用的是新机器，特别容易太的太薄。如果你做好这一块，应该说百分之六、七十的分数就有了。

2、冰晶：冰晶会使诊断产生误诊，特别是软组织肿瘤和含水量较高的组织。这是我们很多技术员不重视的，也有很多人认为，冰冻切片机室温一样，没办法改变，大家都一样。其实不然，这里也有很多决窍：托盘要冷，不要把托盘拿出来放组织，更不能把托盘放在外面；胶要少，不放最好（但缺点是组织容易粘不牢，切片时边上会有小皱），必须用冷锤压，这样冻的更快，在机器没有冷锤情况下如何解决？可以用托盘的背面压，这个方法我试过几次，存在一定风险，就是怕粘住了下不来，要等冻透了才行，拿下来时有可能是不该下来的那面先下来了。所以我科选手也没敢用。第一名广西的选手有可能用了，我看到过她片子的外观：特别大，呈园形，可能是压过了。这就要求我们技术员要搞清楚冰晶的形成机制和随机应变的能力。

3、注意有没有切全，有没有空洞，有没有污染。

4、小皱、刀痕、气泡等等，这些都是小分，只有在以上相同情况下，才会有差距。

很多选手认为只要切得平整，没皱，没气泡，没刀痕，染色好，就有高分，其实是错误的，这只是做了表面文章。所以说：一个不懂诊断的技术员成不了好技术员，因为你不知道诊断需要什么，重点是什么，你就不知道如何去提高质量。因此做一个好的技术员必须学会诊断。

5、固定液的选择并不十分重要：95%酒精、甲醇、AAF液、环保固定液都是醇性固定液，性质相关不大，区别并不十分明显。

6、掉片：冰冻片直接固定，一般不会掉片，只有4%甲醛容易掉。也可能是片子切的太厚了，切薄了就不容易掉。在日常工作中，蛋白质成份较少的组织：角质层的或软骨，如指甲、气管容易掉。解决方法：在甲醇内加冰醋酸也不容易掉；有一些没有蛋白质的我试过用液基细胞（TCT）的阳离子玻片（国外免疫组化也用），效果非常好。

7、染色太浅可以按顺序退回去重染，包括苏木素和伊红。染色后脱水低浓度酒精过得太快导致脱水不彻底，片子上还有水珠；透明度不好；透明液出来后擦片子时间太长，片子干了，出现空气结晶；片子封反了等等这样的低位错误千万不能犯。

  这是我在这次比赛中的个人感觉，希望对大家有帮助，比赛的主要目的不是为了比谁强，而是应该发现问题，找到解决问题的方法，改正以前不正确的方法，共同提高全国的切片水平。如果比完了，奖一发、酒一喝，回家原来怎么做还是怎么做，那这样的比赛就没有任何意义了。

【来自公众号 中华病理技术网】

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