我的博文
病理组织脱水：从原理到实践的几点体会
组织脱水是病理制片中容易被忽视却至关重要的一环。现在多数实验室都用全封闭式脱水机，机器一按就自动运行，反而让人忽略了脱水环节本身的门道。
脱水的基本原理
组织在固定液里泡久了，里面全是水分。但要做成蜡块长期保存，必须把这些水换成石蜡。问题在于水和石蜡不相溶，水也不溶于二甲苯。好在乙醇既能溶于水，又能溶于二甲苯，而二甲苯又能和石蜡相溶——于是乙醇和二甲苯就成了媒介，一步步把水置换出去，把石蜡引进来。
流程也就清晰了：组织依次浸入梯度酒精、二甲苯、石蜡。酒精把水置换出来，二甲苯把酒精置换出来，最后石蜡把二甲苯置换出来。每一步都是为了下一步铺路。
关于梯度和时间
组织突然泡进高浓度酒精，表面会迅速收缩变硬，形成一层“硬壳”，里面的酒精进不去，水分也出不来。这就是为什么必须从低浓度到高浓度慢慢来，而且高浓度酒精里不要泡太久。
有研究指出，乙醇的脱水能力在60%到95%之间相对稳定，低于60%就明显下降，初始浓度低于50%的话很快就会失去脱水效果。所以第一缸酒精的浓度最好控制在70%左右，既不会太猛，又能有效脱水。
实践中发现，组织在95%酒精里多泡一会儿有利于脱水，但在无水酒精里要控制好时间，每道1到2小时比较合适，时间太长组织容易收缩变硬。
温度的控制
温度对脱水效果影响很大。我们试过，固定、脱水、透明这几个环节，温度超过35℃，组织很容易变硬、收缩。所以一般把温度设定在35℃以下。浸蜡的温度也要把握好——刚刚超过石蜡熔点就行，熔点58到60℃的石蜡，蜡缸设62℃左右比较合适，太高可能烫坏组织。
试剂的更换有讲究
根据观察，常规之下第一缸75%酒精每次脱水后浓度会下降约2%，用了19次之后浓度就只剩50%了。每次脱59个组织，大概处理1121个组织后，就需要更换第一缸酒精，后面的依次前移。
有意思的是，他发现从第10次开始酒精浓度下降，于是调整了脱水时间——把第一缸75%酒精减少30分钟，第二缸75%酒精增加30分钟，同时在倒数第二缸无水酒精里增加20分钟。这样调整下来，脱水效果很不错。这说明可以根据标本量设计不同的脱水程序，比如设一个常规程序和一个处理了600个组织后的调整程序，按需切换。
容易被忽视的水洗环节
固定后的水洗也很关键。水洗不彻底，切片容易脱片，染色也不够鲜亮。尤其是要做免疫组化的组织，残余的福尔马林会破坏抗原，充分水洗非常重要。
以前我们用机洗，设置半小时让机器自己循环冲洗，但洗来洗去水还是那缸水，福尔马林浓度越积越高，根本洗不干净。后来改成流水冲洗半小时，每次都是新鲜清水，冲刷力也更强，效果明显好很多。
最后几点提醒
取材不要太厚，理想大小是2厘米乘2厘米乘3毫米左右。固定不好，后面的脱水、染色都会受影响。
乙醇和二甲苯不要同时更换，换一种就行，两种一起换容易让组织变脆。
二甲苯是致癌物，更换试剂时一定要在通风橱里操作，做好个人防护。
脱水这个环节，说起来简单，但每个细节都影响着最终那张切片的质量。设备稳定了，程序设好了，试剂按时换了，剩下的就是把这些细节一个一个做好。
了解更多可访问泰维科技（https://www.taiva.com.cn/）获得更多设备以及技术相关信息
我要评论
共0条评论