过碘酸—Schiff氏法（简称P.A.S）

操作方法：

（1）           石蜡切片脱蜡至水。

（2）           0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液（过碘酸再结晶应重新配制使用）。

（3）           蒸馏水洗，70%酒精洗。

（4）           Schiff氏液15-30分钟。（Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用）

（5）           流水冲洗10分钟。

（6）           苏木素浸染细胞核2-3分钟。

（7）           脱水、透明、封盖。

结果：糖原呈红色，细胞核呈蓝色。

试剂配制：

（1）0.     5%过碘酸（HIO₄）水溶液或70%酒精溶液。

（2）Schiff氏试剂。

碱性品红                                           1g

蒸馏水                                             200ml

1N盐酸（98.3ml比重1.16盐酸，加入蒸馏水成1000ml） 20ml

偏重亚硫酸钠或钾                                    1g

碱性品红1g加入200ml蒸馏水，搅拌加热沸腾，待冷却至50℃过滤，加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处，两天后溶液变桔黄色或草黄色，然后加入少量活性碳并震荡、过滤，此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色，染色效果较差。

注意事项：

1、   糖原的固定要及时，而且标本要新鲜。

2、如用无水酒精作糖原的固定剂，有它的弊病，因无水酒精渗透较慢，而且容易产生极化，（极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端）。故用Gendre氏固定液效果较佳，其配法如下：

苦味酸饱和于95%酒精           85ml

40%甲醛                        10ml

冰醋酸                          5ml

3、各种试剂必须化学纯，亚硫酸钠须有浓厚气味，器皿必须洁净而干燥，染色缸亦是。

4、如果Schiff氏试剂，在经过活性碳吸附漂白后不显无色，首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓，使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身，常常虽属同一生产厂家，但不同批号，其效果就可能不同，应特别引起注意。

配方六 席夫（Schiff’s）试剂

　　称取0.5克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠（）或无水亚硫酸氢钠（ ）。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5克活性炭，用力摇荡1分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。如溶液变成红色，即失去染色能力。

碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgen’s）反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。

配制及保存方法：称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角瓶），时时振荡，继续煮5min（勿使之沸腾），充分溶解。然后冷却致50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCl，冷却致25℃时，加入0.5g偏重硫酸钠，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有时需要2至3天），使其颜色退至淡黄，然后加入0.5g活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏生亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可再用。

　　schiff试剂染色DNA时需在避光条件下进行。与shiff试剂反应的DNA，必须时被解离过的，因为显色原理是DNA中醛基与无色品红结合得到，而完整双链DNA也无醛基的，只有被水解后碱基与脱氧核糖之间的键打开，才会在脱氧核糖上形成游离醛基。

盐基品红

　　CAS：632-99-5

　　分子式：C20H20ClN3

　　分子质量：337.85

　　熔点：250℃

　　碱性品红；盐基品红；品红,洋红；深红色,红色苯胺染料

　　Basic magenta；C.I. Basic violet 14；12418 red；aizen magenta；aniline red；astra fuchsine b；basic fuchsine；basic magenta e-200；basic violet 14；4-((4-aminophenyl)(4-imino-2,5-cyclohexadien-1-ylidene) methyl)-2-benzenamin

　　性状描述：黄绿色闪光结晶块状或砂状物。溶于冷、热水中呈红紫色，极易溶于酒精中呈红色。遇浓硫酸呈黄棕色，稀释后几乎无色。其水溶液加氢氧化钠液呈带有红色沉淀的几乎无色液体。

　　将苯胺、对甲苯胺和邻甲苯胺与硝基苯、氯化亚铁一起熔融，进行氧化缩合，而后用硫酸溶解提取，再经中和、盐析、过滤及干燥即得成品。

　　原料消耗(kg/t)对甲苯胺 635 盐酸（31%） 210 邻甲苯胺 1170 硫酸 1900 苯胺 470 氯化锌（98%） 785 硝基苯 1000 氢氧化钠（100%） 970 对硝基甲苯 360 碳酸钙 330 氯化亚铁（98%） 800