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转--实验动物病理标本的标准化取材和量化诊断方法
近年来,由于实验动物病理检验工作质量控制观念的引进,要求将病理标本从取材到读片的全过程进行标准化操作。目前国内实验病理学界对此尚无统一标准。参考国内外实验病理学界和其他生物学实验的标准操作规程制定,从而对实验动物病理标本的取材和读片的标准化操作提出以下方法。
1. 动物的处死、组织的固定和取材
(1)小动物每试验组6-10只进行病理检验。大动物病理检验数依要求而定。动物处死前禁食12 h。均用麻醉放血法处死。
(2)按实验要求的顺序打开胸、腹腔,摘取脏器并准确称重。计算脏器系数。摘取时不可损伤所取脏器。心脏不挤压心腔内血块,肝脏分叶固定,肾脏去除包膜。除特殊要求外,均固定于10%中性甲醛溶液中。固定液体积应1倍于所固定脏器,组织须定时翻动。脏器固定24 h后即可取材,再固定48 h即可进行脱水、包埋。
(3)各受检脏器均先取肉眼可见病变处。小动物按整个脏器的冠状或矢状切面与表面垂直整片取材。大动物根据要求局部取材,面积均为1.2cm×1.0 cm。厚度均为0.3 cm。
(4)脏器具体取材部位如下:
心:小动物在主动脉根部行矢状切,取材剖面包括心房、心耳、室间隔、左、右心室壁和主动脉根部。大动物在上述部位各取一块。取材时与心肌纤维长轴平行。
肝:小动物在肝脏上缘1/3处与肝表面垂直作矢状切,应包括肝门血管及胆囊。每只动物至少取三叶肝。
脾:小动物在脾长轴1/2处与脾表面垂直作冠状切,大动物在脾门处取材。
肺:每只动物最少取三叶肺,左、右肺均在肺门处冠状切取材。包括肺门血管、气管和淋巴组织。
肾:在左、右肾门处包括肾盂冠状切取材。
脑:小动物沿右侧大脑中缝处矢状切,包括小脑及延髓整片取材。大动物在视交叉、垂体窝和大、小脑交界处冠状切取材,包括脑皮、髓质。
胃:大、小动物均于胃底长轴矢状切取材,长1.2 cm,宽0.3 cm,包括消化道全层。小动物包括前胃和腺胃。大动物包括贲门、幽门、大弯和小弯。
睾丸:取两侧,在长轴1/2处冠状切取材。
乳腺:包括乳头矢状切取材。
子宫、阴道、十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠在其长轴的1/2处冠状切取材。胰、肠系膜等薄片状脏器,小动物固定后卷成卷,截面最大处取材。附睾、前列腺、精囊腺、尿道球腺、肾上腺、胸腺、垂体、松果体、甲状腺、卵巢、眼球等脏器,小动物在截面最大处冠状切,取整片或整体包埋。大动物取所需部位。
2 切片病变的定量观察
(1)常规HE染色,切片厚度应≤4μm。
(2)光镜下首先区分有否特异性病变及范围,然后由脏器一端向另一端进行整体观察和描述。
(3)观察小动物脏器有否肿大、增生,用l0倍镜由一端开始计数该脏器包含的l0倍镜镜头视野数,或计数整个切片中功能单位数。如脾生发中心、胸腺小叶、肝小叶、肾小球及整个切片中病变灶数量。
(4)大动物脏器疑有肿大、增生时,用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。心肌、骨骼肌在与长轴平行的切面上计数每一视野直径中的肌纤维数,肝小叶中肝细胞索数(数40倍镜视野的一半)。根据需要计数l0-20个40倍镜视野。
(5)确定病灶大小及积分用40倍镜头进行观察。先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切,再观察该病灶在这一视野中的比例。≤40倍镜头视野1/3的为小灶病变,积1分。>1/3<2/3的为小片病灶积2分。>2/3的为大片病灶积3分。计数所有病灶的积分。
(6)实验动物肿瘤发生率的计算:动物肿瘤的组织分化常不明显,在长期毒性试验或诱癌实验中出现的肿瘤不论良、恶性均计入肿瘤发生数,并计算肿瘤发生率。
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