个人资料

最新评论

我的博文

骨组织病理--骨组织脱钙的注意事项

2020-06-18 17:09  阅读(137)  评论(0)  分类:病理技术

 骨组织病理--骨组织脱钙的注意事项

 

病理实验制片过程中,我们经常会遇到含钙高的组织,因其组织结构质地太硬,组织中存有的钙盐会妨碍使用常规方法制作良好切片,经固定后,必须除去钙盐使组织软化,方能进行常规切片。


骨组织含钙量最多,所以脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其需要进行免疫组化的骨组织。


为了达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织的抗原不受破坏,需对骨组织固定之后再脱钙或采用兼有固定与脱钙的试剂处理,然后才能常规制片。


 

一、骨脱钙方法


常见的脱钙方法主要有单纯酸类脱钙法、混合酸类脱钙法以及有机螯合剂法。


单纯酸类脱钙法:


主要有甲酸、硝酸、盐酸等,硝酸和甲酸应用最多。


①   甲酸是一种使用范围较广的脱钙剂,浓度一般10%,脱钙速度较慢,适合骨髓组织脱钙,不适合皮质骨的脱钙。


②   硝酸脱钙液缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色,产生颜色即迅速影响脱钙速度,且组织的黄染会妨碍随后的染色,可在硝酸内加入0.1%尿素可以防止变黄而使之无色。


③   盐酸脱钙液易使组织收缩,作用速度较快,用氯化钠作为溶剂则效果良好。


混合酸类脱钙法:


两种酸类脱钙剂一起使用,或在单纯酸内加入另一种脱钙剂或少量的其它试剂所配制的脱钙液。


特点是脱钙完全,快速,防止纤维组织过度膨胀,减少组织破坏对染色结果的影响,通过加入不同的化学成分可以弥补单纯酸类脱钙剂的不足。


 

①   含甲酸脱钙液(甲酸-福尔马林液)


配方:甲酸                 5-25ml

        福尔马林            5ml

        蒸馏水     加至    100ml


5%的甲酸是良好的一种常规脱钙剂,速度适当,组织损害小。当甲酸成分增至25%则增快脱钙速度,加入甲醛可适当保护组织不受酸损害(注意:增加脱钙速度只能靠牺牲细胞微细构造来获得)。根据组织的厚度和钙化程度,5%甲酸在2至4天可以完全脱钙。


②   含盐酸脱钙液(Von Ebnei氏液)


配方:浓盐酸             15ml

氯化钠             7.5ml

蒸馏水    加至   100ml


   含硝酸脱钙液


配方1:福尔马林              5ml

          硝酸(比重1.41)  7.5-15ml

          蒸馏水    加至       100ml


此配方中甲醛可以部分抑制硝酸的浸软作用,同时具有固定作用,硝酸脱钙迅速,组织不膨胀,掌握好可以直接脱水,不影响染色。不过最好先洗去硝酸。


配方2:硝酸(用0.1尿素稳定)   5-10ml

           蒸馏水           加至       100ml


此配方用作常规脱钙剂,作用迅速,对组织不膨胀,对细胞的保存和染色比前者更好,能适用于多种染色技术,但最好每日早晚更换一次新鲜溶液,一般1-3天完成。


   螯合剂脱钙


EDTA乙二胺四乙酸)是用于脱钙螯合剂。为有机化合物,有结合某些金属的能力,能结合钙盐,15%的溶液即起脱钙作用,组织用此方法脱钙,对组织破坏性小,即放置数月亦不致引起对组织的破坏,对以后大多数的染色技术皆可得到满意结果。



二、骨脱钙步骤


1.取材:将骨组织固定于10%福尔马林24小时后再锯取厚度约0.5厘米骨片。


2.固定:再以10%福尔马林固定2天。


3.将组织置于脱钙剂中,每日更换新鲜液、直至组织软化为止。


4.流水冲洗24小时/2%亚硫酸钠水溶液中和,至少3小时,水洗至少1小时(除酸)。


5.进行常规脱水,透明,浸蜡,切片。



三、鉴定脱钙是否彻底


确定脱钙“终点”有以下三种方法:


1. 最常用的是最简单的方法――针刺,如果很容易被刺透,而且不感到阻力时,说明组织基本上脱钙完全,否则应继续脱钙。


靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住,而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。


2.用X射线检查:看组织内是否仍有钙质。


3.用化学实验检查:


取5ml脱钙液用2M的NaOH(氢氧化钠)调整至中性,再加5%草酸钠或草酸铵1ml,液体混浊表示有钙质。迟至5分钟仍不混浊表示脱钙液中不含有钙质。


组织中仍有钙质时,一定量的钙离子会溶于脱钙液中,游离的钙会干扰脱钙作用的完成。显然,应在每次试验时完全更换,在试验中必须经过2-3小时间隔让钙溶解。



四、优质脱钙剂的标准


(a)完全脱钙;


(b)不损伤组织细胞或纤维;


(c)不妨碍以后的染色技术;


(d)适当的脱钙速度。

 

弗瑞思提供组织病理学全套技术服务、病理实验相关的试剂耗材以及开展病理研究相关的培训服务。

 

骨组织病理--骨组织脱钙的注意事项

我要评论

0条评论